Содержание
Список литературы диссертационного исследования доктор медицинских наук Балдуева, Ирина Александровна, 2008 год
1. Анисимов В.В., Вагнер Р.И., Барчук А.С. Меланома кожи (Ч. 1). — СПб.: Наука,1995.—151 с.
2. Барышников А.Ю., Кадагидзе З.Г., Махонова Л.А. и др. Иммунологический фенотип лейкозной клетки. — М.: Медицина, 1989. —240 с.
3. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза. — М.: Эдиториал УРСС, 2002. —320 с.
4. Брондз Б.Д. Т-лимфоциты и их рецепторы в иммунологическом распознавании. — М.: Наука, 1987.—470 с.
5. Вагнер Р.К, Анисимов В.В., Барчук А.С. Меланома кожи (Ч. 2). — СПб.: Наука,1996.—274 с.
6. Воробьев А.А. Молекулярные основы иммуногенности антигенов. — М.: Медицина, 1982,—272 с.
7. Говалло В.И. Иммунология тканевой несовместимости. — М.: Медицина, 1971.— 204 с.
8. Давыдов М.И., Нормантович В.А., Полоцкий Б.Е. и др. Иммунотерапия «интерлейкин-2/ЛАК» в лечении больных злокачественным плевральным выпотом // Вестн. Моск. онкол. об-ва. — 1998. —№9.—С.6—7.
9. Демидов JI.B. Адъюванты вакцин: новая роль GM-CSF // Материалы Европейской школы по онкологии. — М.,1999.— С.1—13.
10. Зарецкая Ю.М. Клиническая иммуногенетика. — М.: Медицина, 1983.—208 с.
11. Земское A.M., Земское В.М., Караулов А.В. Клиническая иммунология: учебник для вузов / Под ред. A.M. Земскова. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005,—320 с.
12. Иоффе В.К, Иоаннесян-Зверкова Б.И. Общая иммунологическая реактивность организма. — Л.: Медицина, 1979.—184 с.
13. Караулов А.В. Клиническая иммунология и аллергология / Под ред. А.В. Караулова. — М.: Ньюдиамед, 2002.—651 с.
14. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С., Ищенко A.M. и др. Иммуномодулирующий препарат «Беталейкин» // Описание изобретения: Авт. свид. №98107188/13 от 23.04.98.
15. Киселев С.Л., Ларин С.С., Гнучев Н.В., Георгиев Г.П. Ген tag7 и генотерапия рака // Генетика.—2000. — Т.36, №11 .—С. 1431—1435.
16. Киселевский М.В., Казанова Г.В., Варфоломеева С.Р. и др. Опыт применения интерлейкина-2 и лимфокинактивированных клеток-киллеров в терапии онкогематологических заболеваний у детей // Иммунология.—2002. — Т.23, № 1.— С. 56—59.
17. Ломакин М.С. Иммунобиологический надзор. —М.: Медицина, 1990.—256 с.
18. Манъко В.М., Михайлова А.А., Петров Р.В., Хаитов P.M. Контроль и регуляция иммунного ответа. —Л.: Медицина, 1981.—311 с.
19. Медуницын Н.В. Вакцинология. —М.: Триада-Х, 1999.—272 с.
20. Медуницын Н.В. Повышенная чувствительность замедленного типа (клеточные и молекулярные основы). — М.: Медицина, 1983.—160 с.
21. Мечников И.И. Вопросы иммунитета: избранные труды. — М.: Изд-во АН СССР, 1951.—735 с.
22. Моисеенко В.М. Биотерапия солидных опухолей // Вопр. онкол. —1998. — Т.44.— №1.— С.58—64.
23. Моисеенко В.М. Возможности вакцинотерапии меланомы кожи // Практ. онкол. — 2001. №4(8).—С.56—64.
24. Моисеенко В.М. Возможности вакцинотерапии меланомы кожи // Рос. онкол. журн. — 2005. —№ 2,—С. 52—56.
25. Петров Р.В. Иммунология и иммуногенетика. — М.: Медицина, 1976.—326 с.
26. Петров Р.В., Хаитов P.M. Искусственные антигены и вакцины. — М.: Медицина, 1988.—287 с.
27. Петров Р.В., Хаитов P.M., Манько В.М., Михайлова А.А. Контроль и регуляция иммунного ответа — JL: Медицина, 1981.—311 с.
28. Семиглазов В.Ф., Моисеенко В.М., Черномордикова М.Ф., Меркулов Э.В. Темп роста первичного рака молочной железы // Вопр. онкол. —1988. —Т.34. —С. 166— 171.
29. Хаитов P.M. Иммунология: учебник для студентов мед. вузов. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006 —320 с.
30. Химиотерапия опухолевых заболеваний: Краткое руководство / Под. ред. Н.И.Перевозчиковой. — М, 2000.—342 с.
31. Чиссов В.И., Старинский В.В. Злокачественные новообразования в России в 1999 году. Москва — 2000 г.
32. Якубовская Р.И. Современные подходы к биотерапии рака // Рос. биотер. журн. — 2002. — Т. 1, № 3.—С. 5—14.
33. ЪЪ.Яртин А.А. Основы иммунологии — М.: Медицинская литература, 1999.—607 с.
34. Abe R. Regulation of immune response by T cell co-signaling // Nihon. Rinsho. Meneki.Gakkai. Kaishi.—2005. —Vol.28. —P.21—32.
48. Banchereau J., Brieve F., Caux C. et al. Immunobiology of dendritic cells I I Ann. Rev. Immunol. —2000. —Vol.18. —P.767—771.
55. Bendelac A., Savage P.В., Teyton L. The biology of NKT cells // Annu. Rev. Immunol. —2007. —Vol.25. —P.297—336.
57. BerdD. Cancer vaccines: Reborn or just recycled? // Semin. Oneol. —1998. —Vol.25. —P.605—610.
59. Bergman P.J. Anticancer vaccines // Vet. Clin. North. Am. Small Animal. Pract. —2007. —Vol.6.—P.l 111—1119.
66. Boon Т. II Toward a genetic analysis of tumor rejection antigens // Adv. Cancer Res. — 1992. —Vol.58. —P.177—210.
67. Boon Т., van der Bruggen P. Human tumor antigens recognized by T lymphocytes // J. Exp. Med. —1996. —Vol.183. —P.185—187.
68. Brandau S., Bohle A. Activation of natural killer cells by Bacillus Calmette-Guerin // Eur. Urol.—2001.—Vol.39.—P.518—524.
72. Brugarolas J. Renal-cell carcinoma molecular pathway and therapies // N. Engl. J. Med. —2007.—Vol.356. —P.725—729.
73. Cadman L. Cervical cancer prevention: vaccine for girls // Paediatr. Nurs.—2006.— Vol.18.—P.26.
78. Chapman P.B. Melanoma vaccines // Semin. Oncol. — 2007,—Vol.6.—P.516—523.
79. Chaput N., Taieb J., Schartz N.E.C. et al. Exosome-based immunotherapy // J. Immunol. Immunother. —2004.—Vol.53. —P.234—239.
82. Chiringhelli F., Zitvogel L. Vaccine strategies against melanoma // Med. Sci. (Paris). —2006.—Vol.22.—P. 183—187.
92. Davis M.M., Krogsgaard M., Huse M. et al. T cells as a self-referential, sensory organ // Annu. Rev. Immunol. —2007.—Vol.25. —P.681—695.
98. DeVita V.T., Deisseroth A.B. Oncology // JAMA—1996.—Vol.275. —P.1833— 1834.
102. Disis M.L. Cheever M.A. Oncogenic proteins as tumor antigens // Curr. Opin. Immunol. —1996. —Vol.8. —P.637—642.
104. Dranoff G. GM-CSF-based cancer vaccines // Immunol. Rev.—2002.— Vol.188.—P. 147—154.
118. Fong L., Engleman E.G. Dendritic cells in cancer immunotherapy // Annu. Rev. Immunol.—2000. —Vol. 18.—P.245—273.
121. Frey A.B., Monu N. Signaling defects in anti-tumor T cells // Immunol Rev. — 2008.—Vol.222.—P. 192—205.
132. Greten T.F., Jafee E.M. Cancer vaccine // J. Clin. Oncol. — 1999.—Vol.17. — P. 1047—1060.
154. J erne N.K Towards a network theory of the immune system // Ann. Immunol. (Paris).—1974. —Vol.125. — P.373—389.
174. Kuehn B.M. CDC panel backs routine HPV vaccination // JAMA.—2006. — Vol.10. —P.559—560.
201. Matzinger P. The danger model: a renewed sense of self // Science.—2002. — Vol.296. —P.301—305.
205. Mellado В., Gascon P. Molecular biology of renal cell carcinoma // Clin. Transl. Oncol. —2006. —Vol.8. —P.706—710.
207. Mocellin S., Use M., Nitti D. Tumor immunology I I Adv. Exp. Med. Biol.—2007. —Vol.593. —P. 147—156.
212. Morris L.E., Ribas A. Therapeutic cancer vaccines // Surg. Oncol. Clin. N. Am. -— 2007,—Vol.4. —P.819—831.
217. Munn D.H., Mellor A.L. IDO and tolerance to tumors // Trends Mol. Med.—2004. —Vol.10.—P.15—18.
224. North R.J. Down-regulation of the antitumor immune response // Adv. Cancer Res.—1985. —Vol.45. —P.l—43.
225. North R.J., Awwad M., Dunn P.L. The immune response to tumors // Transplant. Proc.—1989. —Vol.21. —P.575—577.
234. Osada Т., Clay T.M., Woo C.Y. et al. Dendritic cell-based immunotherapy // Int. Rev. Immunol.—2006. Vol.5.—Р.377-Ч13.
242. Pardoll D.M. Immunology. Stress, NK receptors, and immune surveillance // Science.—2001. —Vol.294. —P.534—536.
243. Pardoll D.M. Inducing autoimmune disease to treat cancer // Proc. Natl. Acad. Sci USA. —1999. —Vol.96. —P.5340—5342.
244. Parmiani G., Castelli С., Rivoltini L. et al. Immunotherapy of melanoma // Semin. Cancer Biol.—.2003. —Vol.13. —P.391-^100.
247. Pawelec G. Immunotherapy and immunoselection tumor escape as the final hurdle // FEBS Lett.—2004. —Vol.567. —P.63—66.
256. Prehn T.T., Main J.M. Immunity to methylcholanthrene-induced sarcomas // J. Natl. Cancer. Inst. —1957. —Vol.18. —P.769.
260. Re is e Sousa C. Dendritic cells as sensors of infection // Immunity.—2001. —-Vol.14.—P.495-498.
266. Robinson H.L., Amara R.R. Tcell vaccines for microbial infections // Nat. Med.-2005. — Vol. 11.—P.25—32.
271. Rosenberg S.A. Shedding light on immunotherapy for cancer // N. Engl. J. Med.— 2004. — Vol.350. —P. 1461—1463.
283. Schoenberger S.P., Janssen E.M., Droin N. et al T-help, TRAIL and CTL memory // Cancer Immunity.—2006. —Suppl.l.—P.23.
291. Shevach E.M. Fatal attraction: tumors beckon regulatory T cells //Nat. Med.— 2004. —Vol.10.—P.900—901.
299. Slingluff C.L.Jr., Speiser D.F. Progress and controversies in developing cancer vaccines // J. Transl. Med—2005. —Vol.3. —P.18.
304. Sosman J.A. When will melanoma vaccines be proven effective? // J. Clin. Oncol. —2004. —Vol.22.—P.387—389.
315. Storcus W.J., Zarour H.M. Melanoma antigens recognised by CD8+ and CD4+ T cells // Forum (Genova). —2000. — Vol. 10. — P.256—270.
331. Unanue E.R. From antigen processing to peptide-МНС binding // Nat. Immunol. —2006. —Vol.7. —P. 1277—1279.
339. Wang R.F., Rosenberg S.A. Human tumor antigens for cancer vaccine development//Immunol. Rev. —1999. —Vol.170. —P.85—100.
345. Williams M.A., Bevan M.J. Effector and memory CTL differentiation // Annu. Rev. Immunol. —2007. —Vol.25. —P. 171—192.
351. Yu Z, Restifo N.P. Cancer vaccines: progresss reveals new complexities // J. Clin. Invest—2002. —Vol.110.—P.289—294.
360. Оценка лечебного действия противоопухолевых средств у больных ссолидными опухолями (по ВОЗ)
361. Полная регрессия — исчезновение всех поражений опухолевых очагов.
362. Частичная регрессия — большее или равное 50% уменьшение площади всехопухолевых очагов, при отсутствии новых поражений.
363. Сумма полного и частичного регрессов составляет объективный лечебный ответ.
364. Стабилизация — уменьшение менее, чем на 50% при отсутствии новыхочагов или увеличение не более чем на 25% всех опухолевых очагов.
365. Прогрессирование — большее или равное 25% увеличение размеровопухолевых очагов или появление нового опухолевого очага.
366. Токсичность СТС NCIC (расширенная шкала ВОЗ)
367. Условия для приготовления вакцины на основе аутологичных опухолевых клеток и костномозговых предшественников дендритныхклеток
368. Сепаратор клеток крови («СОВЕ Spectra», Германия).
369. Стерильный модуль («Air Lock», США) — класс очистки 100 во всех частях рабочей зоны (по американскому федеральному стандарту 209 Е).
370. Ламинарно-потоковый бокс («CAT-R4», Финляндия) степень очистки рабочей зоны бокса соответствует требованиям класса 10.
371. Медимашина с разовыми стерильными наборами ножей и клеточных фильтров (медиконы, филконы) для дезагрегации образцов опухолевой ткани («Dako», Дания).
372. Центрифуга напольная РС-6, настольная («Элекон ЦЛМН-Р10-01», Россия).
373. Световой микроскоп МСХ300 с видеокамерой («Micros», Австрия).
374. Инвертированный микроскоп с цифровой камерой («Leuca DMIL», Германия).
375. Люминисцентный микроскоп («Zeiss», Германия).
376. Морозильная камера -70°С («Sanyo», Япония), лабораторный холодильник -20 °С и +4°С (Россия).
377. COi-инкубатор («Нега Cell», Франция).
378. Криокомплекс с программным замораживателем («SY Lab», Австрия).
379. Электронные и автоматические дозаторы (Финляндия).
380. Стерильная разовая лабораторная посуда (культуральные флаконы, серологические пипетки, пробирки и др.) (Германия, Финляндия, США).
381. Питательные среды, ростовые факторы, моноклональные антитела и т.п. (Германия, Дания, Великобритания, США, Россия).
382. Исследование поверхностного фенотипа клеток иммунной системы. Метод непрямой иммунофлюоресценции
383. Выделение лимфоцитов из крови
384. Исследование поверхностного фенотипа лимфоцитов
385. Изучение поверхностного фенотипа лимфоцитов позволяет выявить различные популяции и субпопуляции лимфоцитов, покоящиеся и активированные клетки, клетки в апоптозе.
386. Исследование функциональной активности Т-лимфоцитов. Реакция торможения миграции лейкоцитов
387. Проводили расчет спонтанной миграции (СМ).
388. Определение концентрации иммуноглобулинов (Ig) Л, М, G. Метод радиальной диффузии по Манчини
389. Определение циркулирующих иммунных комплексов.
390. Метод осаэвдения полиэтиленгликолем
391. В работе использовали метод преципитации 3,5%-ным раствором полиэтиленгликоля (ПЭГ). Пробы регистрировали с помощью спектрофотометра, длина волны 280 нм против 0,1 н. раствора NaOH. Уровни ЦИК выражали в единицах оптической плотности.
392. Определение функциональной активности моноцитов
Способ иммунотерапии опухолевым лизатом с адъювантом беталейкин больных солидными опухолями
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для лечения больных с диссеминированной меланомой кожи, распространенным раком почки, резистентных к стандартному лечению, но отвечающих на противоопухолевую вакцинотерапию. Для этого вакцину из 107 клеток аутологичного опухолевого лизата соединяют с 60 нг беталейкина и вводят строго внутрикожно паравертебрально в 3 точки на расстоянии 3 см друг от друга. Введение осуществляют каждые 3 недели, причем первую и вторую вакцинации комбинируют с введением 470 нг беталейкина в переднюю брюшную стенку. Продолжение вакцинаций осуществляют в случае положительной реакции гиперчувствительности замедленного типа на введение после каждой вакцинации опухолевого лизата без беталейкина. Способ позволяет индуцировать и поддерживать противоопухолевый иммунный ответ с помощью активированных опухолевым лизатом дендритных клеток без их выделения из организма, а также контролировать эффективность такого ответа.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и может быть использовано для лечения больных с диссеминированной меланомой кожи и распространенным раком почки, резистентных к стандартному лечению (химиотерапии, иммунотерапии, лучевому лечению), но отвечающих на противоопухолевую вакцинотерапию. Противоопухолевая вакцинотерапия — это лечебный и профилактический метод активной специфической иммунотерапии, основанный на использовании антигенов с/без адъюванта для усиления противоопухолевого иммунного ответа. Особенностью действия противоопухолевых вакцин является то, что они индуцируют иммунный ответ, направленный на элиминацию иммунорезистентных опухолевых клеток. Противоопухолевый эффект достигается повторным введением антигенного материала в режиме вакцинотерапии. При этом, как показали клинические и экспериментальные исследования, для повышения эффективности вакцинотерапии необходимо:
— максимальное уменьшение объема опухолевой массы в организме посредством классических методов лечения злокачественных опухолей;
— высокая иммуногенность вакцины;
— достаточная иммунокомпетентность организма с опухолью;
— отсутствие иммуносупрессивных воздействий;
— одновременная активная неспецифическая иммунотерапия (адъюванты) (Моисеенко В.М., Балдуева И.А., Хансон К.П. Вакцинотерапия злокачественных опухолей// Вопросы онкологии. — 1999. — №3. — С.327-332).
Таким образом, формирование устойчивого вакцино-индуцированного противоопухолевого иммунитета в организме с распространенным опухолевым процессом становится важной стратегией иммунотерапии.
Многократно описаны нарушения в иммунном ответе у больных с различными злокачественньми опухолями и у животных с опухолью. Эти нарушения большинство авторов объясняет супрессивной функцией Т-клеток. Клинические и экспериментальные данные о значении функционального состояния антигенпредставляющих клеток (АПК) противоречивы. Некоторые исследователи указывают на дефектную функцию макрофагов при опухолях, в то же время описана нормальная, а иногда и повышенная функция макрофагов у экспериментальных животных с опухолью. В ряде исследований было показано, что активированные макрофаги могут ингибировать или стимулировать рост опухоли, способствовать образованию структурно-аномального комплекса на Т-клетках (Т-клеточный рецептор-СВ3 антиген) и тем самым снижать литическую функцию цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ). Более того, указывается, что макрофаги способны индуцировать толерантность к опухолевым антигенам.
Как стало ясно в последнее время, дендритные клетки (ДК) играют важную роль в процессе опухолевой прогрессии. Установлено, что по причине отсутствия ДК в опухоли или слабой экспрессии молекул HLA I и II класса, а также костимулирующих (вспомогательных) молекул на ДК, инфильтрирующих опухоль, не создается устойчивый антиген-специфический Т-клеточный ответ. По мнению ряда авторов, это может быть следствием продукции злокачественной опухолью факторов (ИЛ-10, ТФР-бета, фактор роста эндотелия и др.), угнетающих дифференцировку, созревание и функциональную активность периферических ДК. При культивировании таких ДК в условиях in vitro, позволяющих получить их максимальный рост и активацию, наблюдается увеличение экспрессии поверхностных молекул, которая коррелирует с иммуногенностью.
Более того, в результате исследований последних лет стала понятна биологическая целесообразность ДК в противоопухолевом иммунитете. Она заключается в следующем: индукция Т-клеточного иммунного ответа требует распознавания Т-лимфоцитами опухолеассоциированных антигенных пептидов в связи с молекулами HLA, которые могут находиться в организме повсеместно. Трудности в распознавании связаны с тем, что количество специфических антиген-HLA комплексов на опухолевых клетках обычно мало (100 и меньше на клетку) и должно быть распознано различными Т-клеточными клонами (обычно с частотой 1/100,000 и меньше) через Т-клеточные рецепторы, которые имеют с ними низкое сходство (1μМ и ниже). Кроме того, на опухолевых клетках часто наблюдается недостаток костимулирующих молекул, которые усиливают клональную пролиферацию (размножение), продуцирующих цитокины и рост Т-клеток-киллеров. ДК решают эти проблемы. Располагаясь в большинстве тканей, ДК захватывают, обрабатывают антигены и представляют их на своей поверхности в виде HLA-пептидных комплексов Т-лимфоцитам. ДК поддерживают также повышенный уровень костимулирующих молекул. После взаимодействия с антигенами они мигрируют в периферические лимфоидные органы, где активируют антигенспецифические Т-клетки.
До последнего времени трудности в изучении ДК были связаны с малочисленностью и ограниченностью специфических маркеров. В настоящее время эта проблема решена. Достаточное количество ДК может быть получено из гемопоэтических предшественников — костно-мозговых клеточных культур, стимулированных соответствующими факторами роста, а также из моноцитов периферической крови, путем культивирования в присутствии ГМ-КСФ, ИЛ-4, ФНО-альфа, ИЛ-1 и др.
В большинстве тканей ДК представлены в форме незрелой покоящейся ДК, которая не способна стимулировать Т-клетки и выполняет наблюдательную функцию. У этой ДК отсутствуют костимулирующие сигналы для Т-клеточной активации (такие как CD40, CD54, CD86 и др.), но она достаточно хорошо «оснащена» молекулами для захвата антигена. Именно захват антигена является пусковым моментом в индукции ее полного созревания и мобилизации. Наблюдательная функция незрелой ДК особенно хорошо прослеживается, когда на поверхности кожи метят in vivo на молекулы ДК (например, окрашивание HLA молекул II класса). У человека в коже обнаружено несколько популяций ДК с отличительными чертами и около 109 эпидермальных клеток Лангерганса (КЛ), т.е. незрелых ДК кожи, которые находятся над базальным слоем пролиферирующих кератиноцитов. Свежевыделенные КЛ слабо стимулируют Т-клетки, у них мало молекул HLA и костимулирующих молекул, но много антигензахватывающих Fcγ и Fcε рецепторов. Этот фенотип основательно изменяется в течение дня культивирования: клетки подвергаются экстенсивной трансформации, антигензахватывающее свойство исчезает, функции, связанные со стимуляцией Т-клеток, усиливаются. В случае, когда кожный лоскут эксплантирован и КЛ захватывают антиген, через некоторое время, обычно через день, наблюдается миграция зрелых ДК в культуральную среду. Подобная же картина имеет место in vivo, когда КЛ встречаются с сильным иммуностимулятором, например антиген-специфическим вакцинным препаратом и сильным провоспалительным цитокином.
Как показано многими исследованиями, незрелые ДК имеют ряд характерных особенностей, которые позволяют именно им захватывать антиген. Они могут фагоцитировать частицы и микроорганизмы, могут образовывать большие пиноцитозные вакуоли (макропиноцитоз). Кроме того, незрелые ДК экспрессируют рецепторы, которые опосредуют адсорбтивный эндоцитоз, включая рецепторы лектина С-типа (подобно маннозному и DEC-205 рецепторам макрофага), а также Fcγ и Fcε рецепторы. Макропиноцитоз и рецептор-опосредованный захват антигена способствует более «качественной» обработке антигена, а представление его пептидов становится таким эффективным, что пикомолярной и наномолярной концентрации антигена оказывается достаточно для активации Т-клеток. Это в несколько раз меньше, чем микомолярные количества обычно «используемых» другими АПК.
ДК, захватившая антиген, теряет способность захватывать другие антигены, в отличие от макрофагов, так как в это время происходит образование антиген-HLA класс II комплексов. Отличительной особенностью ДК является их способность продуцировать большие количества молекул HLA класс II пептидных комплексов за короткий период своей жизни. Этому способствуют специализированные HLA класс-II компартменты, которые в изобилии находятся в незрелых ДК. HLA класс-II компартменты являются поздними эндосомальными структурами, которые содержат HLA-DM или Н-2М продукты, усиливающие и «редактирующие» пептидную связь HLA класса II молекул. В период созревания ДК, фрагменты антигена нагружаются намолекулы HLA II класса и эти комплексы посылаются на клеточную поверхность для анализа Т-хелперам. Для получения клона Т-клеток-киллеров (ЦТЛ), которые способны лизировать опухолевые клетки, ДК представляют на своей поверхности антигенные пептиды, соединенные с молекулами HLA I класса, покоящимся Т-лимфоцитам, экспрессирующим CD8 антиген.
Созревание ДК является чрезвычайно важным моментом в индукции иммунного ответа. На него могут влиять различные факторы, в особенности это относится к продуктам воспаления. Цитокины — ИЛ-1, ГМ-КСФ, ФНО-альфа и ИНФ-альфа, стимулируют созревание ДК, в то время как ИЛ-10, ИЛ-13, ТФР-бета и др. блокируют этот процесс.
Созревание антигензахватывающих ДК сопровождается изменением их формы. При этом они приобретают необычную для клеток крови форму со множеством отростков, что соответствует их названию. При рассмотрении этих клеток через микроскоп видны длинные (>10 μM) и тонкие цитоплазматические отростки (веретенообразные или плоские). При наблюдении за живыми ДК с помощью фазово-контрастной микроскопии можно видеть активные движения цитоплазматических отростков. Эти отростки изгибаются, сокращаются, вновь вытягиваются и втягиваются. Форма и подвижность ДК соответствует их функциям, которые заключаются в отборе антигенспецифических Т-клеток.
Зрелые ДК теряют фагоцитарную способность. Они представляют антиген Т-лимфоцитам (как CD4+, так и CD8+ клеткам). Причем однократно активированные антигенспецифические Т-хелперы способны усилить иммунный ответ путем взаимодействия с ЦТЛ, стимулируя их киллерную функцию и с В-лимфоцитами — для образования антител. Незрелые ДК, как упоминалось ранее, обладают меньшей способностью индуцировать иммунный ответ, но специализируются на захвате антигена для образования HLA-пептидных комплексов. Таким образом, две ключевые функции ДК разделены во времени: сначала незрелые ДК захватывают и обрабатывают антиген, а затем зрелые ДК через день или более стимулируют Т-клетки.
В зависимости от условий ДК могут стимулировать образование и активацию различных клонов Т-клеток. Они способны «заставлять» ЦТЛ, экспрессирующие CD8 антигены, необычно активно пролиферировать. В присутствии ДК и ИЛ-1 Т-хелперы созревают в Т-клетки, продуцирующие ИНФ-гамма, который вместе с ИЛ-12 (продукт ДК) способствует дифференцировке покоящихся CD8+ Т-лимфоцитов в антиген-специфические Т-клетки-киллеры.
Взаимодействие между Т-клетками и ДК высокоспецифическое, в котором Т-клетки так же хорошо отвечают ДК: CD40 рецептор и недавно описанный TRANCER/RANK рецептор на ДК связываются семейством ФНО-белков, экспрессирующихся на активированных Т-клетках и Т-клетках памяти. Это ведет в повышению выживания ДК и, в случае CD40 рецептора, повышает регуляцию CD80 и CD86 молекул, секрецию ИЛ-12 и освобождает некоторые хемокины (ИЛ-8, MIP-1-альфа и бета).
Таким образом, для индукции устойчивого (напряженного) противоопухолевого иммунитета у больных с распространенным опухолевым процессом, резистентных к стандартному лечению, необходимо применять вакцину, механизм действия которой опосредован «высокопрофессиональными» ДК, в том числе клетками Лангерганса и дермальными дендритными клетками, а также использовать адекватный режим вакцинации (Балдуева И.А. Противоопухолевые вакцины// Практическая онкология. — 2003. — Т.4. — №3. — С.157-166).
Прототипом нашего способа является индукция противоопухолевого иммунного ответа ДК, полученными из аутологичных моноцитов периферической крови или костно-мозговых предшественников дендритных клеток и активированных аутологичным опухолевым лизатом in vitro. В последующем эти антигенпредставляющие клетки вводят в организм в режиме вакцинотерапии (Chag А.Е., Redman B.G., Whitfield J.R. et al. A phase I trial of tumor lysate-pulsed dendritic cells in the treatment of advanced cancer// Clin. Cancer Res. — 2002. — Vol.8. — P.1021-1032). Преимуществом нашего метода является то, что мы индуцируем, а также поддерживаем противоопухолевый иммунный ответ в организме с распространенным опухолевым процессом с помощью активированных аутологичным опухолевым лизатом ДК (клетки Лангерганса, дермальные дендритные клетки), исключая этап их выделения из организма.
Технический результат изобретения заключается в активации и созревании (дифференцировке) дендритных клеток кожи (клетки Лангерганса и дермальные дендритные клетки) аутологичным опухолевым лизатом с Беталейкином у больных с распространенным опухолевым процессом. Этот результат достигается путем
— проведения циторедуктивной операции;
— получения образца опухоли не менее 1 куб. см и дезагрегации его в течение 30-60 секунд в стандартных условиях — использование Медикона (разовый стерильный набор ножей и фильтра) и Медимашины («DAKO», Дания);
— очищения диспергированных опухолевых клеток от клеточных конгломератов соединительной ткани в Филконах с клеточными фильтрами 70 μm и 50 μm («DAKO» Дания);
— очищения изолированных опухолевых клеток от клеточного детрита центрифугированием в течение 40 мин при 1200 об/мин в ступенчатом градиенте плотности Перколла («Sigma» США);
— определения жизнеспособности клеток с помощью 0,1% трипанового синего («Sigma» США), камеры Горяева и светового микроскопа («Бимам Р11», Санкт-Петербург) объектив ×10. Количество жизнеспособных клеток составляет 95-97,2% (в рекомендациях Dr. Erba, Institute Marion Negri, Milan, Italy число живых клеток должно быть не менее 93%);
— суспендирования 1011 клеток в 1 мл питательной среде DMEM/F12 (Биолот, РФ), и забор 100 мкл для исследования уровня экспрессии опухолеассоциированнных антигенов и антигенов системы HLA I и II класса;
— ресуспендирования клеток в питательной среде DMEM/F12, содержащей 20% сыворотки эмбрионов крупного рогатого скота (СЭКРС) (Биолот, РФ), 20% кондиционированной среды культуры фибробластов легких эмбриона человека, трансферрин, инсулин, селен в стандартной дозе (Invitrogen, США) и культивирование при 37°С, 5% CO2 и 98% влажности в пластиковых флаконах (Sarstedt, ФРГ);
— замораживания клеток в поддерживающей среде с 10% диметилсульфоксида с помощью программного замораживателя «SY-Lab» при -180°С и хранение в криобанке до использования.
Непосредственно перед использованием производится
— размораживание 107 клеток до комнатной температуры;
— облучение на терапевтическом аппарате «Рокус-у» Со60 1,25 mev при 2000 сГр (мощность дозы 0,99 сГр/с) с целью девитализации опухолевых клеток;
— лизис опухолевых клеток по стандартной методике;
— соединение лизированных опухолевых клеток с 60 нг интерлейкина-1-бета человека (Беталейкин).
Приготовленную вакцину вводили строго внутрикожно паравертебрально в 3 точки на расстоянии 3 см друг от друга. В 4-ю точку вводили опухолевый лизат без Беталейкина с целью контроля реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (иммунологическая реакция in vivo). Внутрикожное введение вакцины комбинировали с подкожным введением 470 нг Беталейкина в переднюю брюшную стенку в 1-й и 2-й дни вакцинации.
Беталейкин применяли местно и системно с целью индукции синтеза и усиления биологического действия колониестимулирующих факторов, в том числе ГМ-КСФ, который необходим для активации и созревания ДК (захват, процессинг и представление опухолеассоциированных антигенов ДК для Т-лимфоцитов в периферических лимфоидных органах).
Вместе с тем, действие вакцины зависит от иммунокомпетентности организма с распространенным опухолевым процессом, которую мы оценивали по ряду лабораторных тестов in vitro и по реакции ГЗТ (4-я контрольная точка) in vivo.
Реакция ГЗТ, которая развивалась на лизат аутологичных опухолевых клеток без Беталейкина в течение 24-48 ч в форме покраснения кожи (3-17 мм) и могла сохраняться в течение нескольких дней, расценивалась нами как признак возможной эффективности применяемого вида иммунотерапии. Таким больным мы продолжали введение вакцины каждые 3 недели до использования аутологичного материала. Реакция ГЗТ коррелировала с клиническим эффектом в 14% случаев, но мы не наблюдали клинической эффективности применяемого способа иммунотерапии без реакции ГЗТ.
В процессе иммунотерапии (каждые 3 мес) оценивали объем метастатических образований опухоли с помощью ультразвукового, рентгенологического методов, а также компьютерной томографии, получение их изображения в динамике. Важным элементом метода является тот факт, что в процессе динамического наблюдения мы имеем возможность своевременно внести коррективы в схему проводимого лечения, изменив ее на более адекватную в случае прогрессирования заболевания.
Анализ известного уровня науки и техники показал новизну метода, т.к. до настоящего времени применяли адъюванты, действие которых не могло обеспечить длительную противоопухолевую напряженность иммунитета посредством «высокопрофессиональных» антигенпредставляющих ДК in vivo.
Изобретательский уровень предлагаемого изобретения подтверждается тем, что метастатические формы солидных опухолей, устойчивых к традиционным методам лечения, требуют разработки новых методов биотерапии, в том числе активной специфической иммунотерапии (вакцинотерапии). Эти знания дополнят наше понимание биологии опухолевого роста и позволят изучить возможности аутологичной вакцинотерапии и механизмы противоопухолевого ответа у больных солидными опухолями.
Для лучшего понимания сущности заявленного изобретения, а также для подтверждения соответствия решения условию промышленной принимаемости приводим примеры конкретной реализции, которыми оно исчерпаться не может.
1. Больной П., 49 лет, рак правой почки с метастазами в параортальные лиматические узлы. После правосоторонней нефрэктомии в марте 1999 г. проведено 6 вакцинаций лизатом аутологичных опухолевых клеток с Беталейкином, с интервалом три недели. В процессе проводимого лечения зарегистрирована реакция ГЗТ (5-8 мм), параортальные лимфатические узлы уменьшились в размерах в среднем с 3 см в диаметре до 1,8 см в диаметре. На момент последнего обследования (март 2001 г.) по данным компьютерной томографии подтверждено уменьшение размеров наблюдаемых лимфоузлов в среднем до 1,2 см в диаметре. Больной прибавил в весе, данных за прогрессирование заболевания нет.
2. Больной Н., 48 лет, рак правой почки с метастатическими поражениями скелета, патологический перелом диафиза правой плечевой кости. После правосторонней нефрэктомии в октябре 2000 года проведено 5 вакцинаций лизатом аутологичных опухолевых клеток с Беталейкином, с интервалом три недели. Реакция ГЗТ регистрировалась после каждого введения (6-8 мм). В процессе лечения и динамического наблюдения (последнее обследование в августе 2001 г.) состояние метастатических образований скелета оценивалось как стабилизация.
3. Больной Б., 54 года, меланома кожи левого плеча, состояние после лазеротерапии (1999), левосторонняя подмышечная лимфоаденэктомия (24.02.2000). Иссечение рецидива опухоли в марте 2000 г. Проведено 6 вакцинаций лизатом аутологичных опухолевых клеток с Беталейкином и интервалом три недели. Реакция ГЗТ (6-12 мм) наблюдалась после каждого введения вакцины. На момент последнего обследования (июнь 2001 г.) данных за прогрессирование заболевания нет.
4. Больной Л., 49 лет, меланома кожи спины с метастазами в левые надключичные и подмышечные лимфатические узлы. Иссечение опухолевого образования в апреле 2000 г. Проведено 3 вакцинации (из планируемых 6 вакцинаций) лизатом аутологичных опухолевых клеток с Беталейкином и интервалом три недели. В процессе лечения реакция ГЗТ не была зарегистрирована, наблюдалось прогрессирование заболевания (появление новых метастатических образований в подкожной клетчатке спины), что послужило основанием для отмены вакцинотерапии и назначения химиотерапии.
Сущность нашего изобретения состоит в том, что мы предлагаем современный, безопасный и действенный способ активной специфической иммунотерапии больных диссеминированной меланомой кожи и метастатическим раком почки наряду с химиотерапией, лучевой терапией, хирургическим лечением или гормонотерапией.
Способ иммунотерапии больных солидными опухолями, включающий введение опухолевого лизата с адъювантом беталейкин, отличающийся тем, что вакцину из 107 клеток аутологичного опухолевого лизата соединяют с 60 нг беталейкина и вводят строго внутрикожно паравертебрально в 3 точки на расстоянии 3 см друг от друга, введение осуществляют каждые 3 недели, причем 1 и 2 вакцинации комбинируют с введением 470 нг беталейкина в переднюю брюшную стенку; продолжение вакцинаций осуществляют в случае положительной реакции гиперчувствительности замедленного типа на введение после каждой вакцинации опухолевого лизата без беталейкина.
Доктор медицинских наук Балдуева Ирина Александровна является основателем метода онкоиммунологии (дендритной вакцины) в РФ. Разработка и введение в клиническую практику медикаментов, стимулирующих защитную способность организма для противодействия злокачественному процессу, позволило онкоиммунологии стать одним из наиболее перспективных методов развития в области терапии онкологических заболеваний, несмотря на то, что раньше в ней сомневались даже доктора. Деятельность Балдуевой Ирины Александровны направлена на иммунотерапию меланомы, саркомы, молочной железы, легких и печени. Кому назначают клеточную иммунотерапию? Иммунная защита организма действует в постоянном режиме, защищая от определённых чужеродных элементов – будь то вирус или собственные клетки тела, подвергшиеся мутации и превратившиеся в злокачественные клетки опухоли.
Балдуева ирина александровнасанкт-петербург
Размельчив полученный биологический материал при помощи специальной машины, специалисты стараются максимально подробно дать характеристику опухоли, выявив все свойства её поведения, а также факторы, которые она продуцирует. Процесс воссоздания клеток иммунной системы, способен возвратить к жизни уже ни на что не реагирующую иммунную систему.
Противораковая вакцина разрабатывается в индивидуальном порядке, за основу берутся собственные клетки крови пациента. Далее клетки вводятся в подкожно или в опухолевые ткани. Задача – восстановить работу иммунной системы, клетки которой (Т- лимфоциты), распознав врага, мгновенно приступят к уничтожению.
Разрешение на применение новой медицинской технологии «Иммунотерапия костномозговыми предшественниками дендритных клеток, сенсибилизированных фотомодифицированными опухолевыми клетками in vivo, больных с диссеминированными солидными опухолями». Членство в профессиональных организациях Российская ассоциация аллергологов и клинических иммунологов (РААКИ), Российское общество онкологов-химиотерапевтов (RUSSCO), Региональная общественная организации «Петербургское онкологическое научное общество», American Society of Clinical Oncology (ASCO), European Society for Medical Oncology (ESMO), European Association of Dermato Oncology, член редколлегии журнала «Российский Биотерапевтический Журнал» Область научных интересов Фундаментальные аспекты онкологии, иммунологии, молекулярной биологии, иммунотерапии, клеточных технологий.
О том, что включает в себя консультация иммунолога И.А.
Женщины года. Кем гордится Ульяновская область
В наше время гораздо проще прославиться скандальными эфирами на ТВ, чем реальными делами. Но не только «шкурыгиными» богата ульяновская земля. В преддверии яркого и весеннего праздника 8 марта мы расскажем о представительницах слабого пола, которые своим трудом, умом и мужеством делают нашу страну лучше и сильнее.
«Железная бабушка»
Женский пауэрлифтинг в Ульяновске всегда был на высоком уровне – чего только стоят достижения Натальи Сальниковой, 7-кратной чемпионки мира в этом виде спорта. Но есть в нашем городе и другая не менее примечательная лифтерша.
Едва отпраздновав 70-летний юбилей, Татьяна Фомина завоевала звание самой сильной пенсионерки на земле. На чемпионате мира по троеборью среди ветеранов спорта в Эстонии она не просто победила, но и поставила в своей возрастной группе мировые рекорды. В сумме становой тяге, жима лежа и приседаний ульяновская бабуля подняла более 300 килограмм.
Стоит отметить, что три года назад Фомина перенесла несколько сложных операций, справилась с тяжелым заболеванием. Однако недуги не помешали многократной чемпионка мира и Европы установить очередной сенсационный рекорд.
Мир на ладошках
Летом 2016-го на Всероссийском молодежном образовательном форуме «Территория смыслов» прошёл грантовый конкурс «Конвейер проектов». Победила в нём магистрант УлГПУ Оксана Краснобай с необычным проектом под названием «Мир на ладошках». Суть проекта проста — молодые люди изготавливают тактильные книги, с помощью которых дети с ограниченными возможностями зрения прочитать русские народные сказки. Первую книжку — сказку «Гуси-Лебеди» Оксана вместе с другими волонтерами подарили библиотеке для слепых. Интерес к таким книгам большой — заявки на изготовление поступают из разных уголков России.
Волонтерской деятельностью Оксана занимается уже более 6 лет. Сейчас она руководит добровольческого движения УлГПУ, она стала одним из победителей регионального конкурса «Общественное признание-2015» в номинации «Доброволец года». Оксана Краснобай занесена в Золотую книгу Почета молодежи Ульяновской области.
Подвиг в бассейне
В прошлом марте в бассейне УГСХА едва не случилась трагедия. Молодая студентка стала тонуть, ей на помощь пришёл тренер по плаванию, но спасти её в одиночку не смогла. В воду бросилась Ирина Балдуева, психолог служебно-боевой подготовки отдела специального назначения «Шквал» УФСИН России. Несмотря на то, что тело девушке уже было на дне, Ирина вытащила утопающую из воды. Девушка уже не дышала, но её легкие освободили от воды.
Ирина Балдуева
Как выяснилось позже, майор внутренней службы Балдуева проводила лишь третью тренировку в бассейне, а до этого занималась бегом и лыжным спортом. Но отсутствие опыта в плавании не помешало девушке решиться на подвиг и спасти человека.
Лучший молодой врач
Летом прошлого года на конкурсе всероссийской организации «Будущее России» в номинации победила представительница Ульяновска. Заведующая терапевтическим отделением 6-й поликлиники Рузина Лурда вместе с двумя коллегами из других регионов стала лучшей в номинации «Лучший молодой врач».
Рузина Лурда
Рузина Лурда с детства мечтала стать врачом. После школы девушка поступила на медфак УлГУ, который окончила в 2008 году. Интернатуру прошла по специальности «терапия», после чего стала работать участковым врачом в 6-й поликлинике. Уже через несколько лет молодой специалист возглавила свое отделение.
По словам министра здравоохранения Ульяновской области Павла Дегтяря, за время работы Лурда добилась многого. На 40% удалось сократить уровень смертности трудоспособного населения, уменьшить число впервые выявленных запущенных случаев онкологических заболеваний. Молодой врач трудится в поте лица – у неё лечатся 1780 жителей Нового города.
Первая чемпионка WorldSkills Russia
Прошлой весной 21-летняя студентка из Ульяновска заняла 1 место на IV Национальном чемпионате «Молодые профессионалы» WorldSkills Russia. С большим отрывом от преследователей Елена Кожинова одержала победу в компетенции «Технология моды». «В первую очередь я соревновалась сама с собой. Мы приезжали на конкурсную площадку в 8 утра и уезжали в 8 вечера. Нам предстояло выполнить пять заданий, дома мы могли подготовиться к ним только на 30 процентов. Многие не выдерживали такого ритма», — рассказывала победительница «Ульяновской правде».
Елена Кожинова
Елена Кожинова обучалась в Ульяновском техникуме отраслевых технологий и дизайна на специальности «конструирование, моделирование и технологии швейных изделий». Уже в 2015-м студентка выиграла в компетенции «Дизайн одежды» на региональном чемпионате Worldskills. Спустя всего год случился новый триумф — девушка стала первой в истории всероссийского WorldSkills победительницей из Ульяновской области. Впереди у Елены соревнования куда серьезнее — в составе сборной России она поедет на мировой чемпионат WorldSkills в Объединенные Арабские эмираты.
Бонус
Несколько дней назад о 12-летней Веронике Устимовой из Ульяновска узнал весь город. Девочка выступила на шоу «Голос. Дети». На этапе слепого прослушивания юная певица исполнила песню Кристины Агилеры «Hurt». «Наставник» шоу Дима Билан высоко оценил выступление Вероники, и взял её к себе в команду. Любопытно, что в прошлом сезоне «Голоса» девочка даже прошла кастинг, но до неё не дошла очередь.
Вероника учится в гимназии №1, а также в музыкальной школе. Девочка уже давно занимается вокалом, исполняет главные роли в мюзиклах. Устимова побеждала в национальном отборе конкурса «Славянский базар-2015», выходила в полуфиналы конкурсов «Детская Новая Волна» и «Детское Евровидение». Теперь Веронике предстоит покорить проект «Голос», и у юной исполнительницы есть все шансы прославить родной город.
Алексей Ласнов
